安捷倫1260液相色譜儀是一種高效的分離和分析技術,通過在固定相(色譜柱)和流動相(溶劑)之間相互作用,實現對混合物中成分的分離和檢測。HPLC在各種領域的科學研究和工業生產中發揮著重要作用。其基本原理是利用化合物在固定相(通常是填充在色譜柱中的吸附劑)和流動相(溶劑)之間的分配系數差異,實現化合物的分離。樣品混合物在色譜柱中受到不同程度的吸附和解吸作用,從而在柱中分離成各個成分。檢測器檢測這些分離的化合物,并生成相應的信號。
1、流動相準備
溶劑純度:使用的溶劑必須達到色譜純(LC)級別。
過濾脫氣:所有溶劑在使用前需經過0.45微米濾膜過濾,并通過超聲脫氣10-20分鐘。這有助于去除雜質和溶解的氣體,防止氣泡影響泵和檢測器的性能。
溶劑連接:確保A管連接有機相,B管連接水相,并且溶劑完q浸沒吸濾頭。
2、設備操作
開機連接:打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道和檢測系統。
沖洗泵閥:如果長時間未用或更換新的流動相,需先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵時,直接在泵的出水口用針頭抽取溶劑;沖洗進樣閥時,在控制界面中點擊purge后再點擊start,速度不要超過10 ml/min。
調節流量:初次使用新流動相時先測試壓力,流速不宜過大,通常不超過2000 psi,然后選擇合適的流速并走基線,觀察基線情況。
3、方法設計
設定方法:在控制界面選擇或創建合適的走樣方法,包括進樣前的穩流、基線歸零、進樣閥的loading-inject轉換和走樣時間。
樣品處理:所有樣品需經過濾后才可進樣。進樣后按照設定的方法進行分析,并在完成后記錄數據和做標記[postrun],最后再用基線方法洗掉剩余物。
4、維護保養
環境條件:保持儀器工作環境干凈、溫度適宜,避免振動和陽光直射。
定期檢查:定期檢查和維護泵、檢測器及管路,確保沒有泄漏或堵塞。
清洗部件:定期清洗泵、閥門和檢測器等關鍵部件,保持其清潔無污染。